PCR基因擴增儀是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
PCR基因擴增儀檢測微量感染因子時,操作人員容易因為污染而導致各種問題。SLD中檢實驗室技術根據(jù)多年行業(yè)經(jīng)驗,給出的建議是:進行PCR操作時,操作人員一定要嚴格遵守一些操作規(guī)程,大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染事故的發(fā)生。
盡管PCR擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應導致的,但樣品間的交叉污染也是常見原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應時要謹慎對待,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應謹慎操作,一般需做到以下幾點:
1、戴一次性手套,若不小心濺上反應液,應立即更換手套;
2、避免反應液飛濺,若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
3、使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免空氣中氣溶膠的污染;
4、操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后再分裝,這樣既可以減少操作次數(shù),避免污染,又可以增加反應的精確度;
5、后加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
6、操作時設立空白對照和陰陽性對照,既可驗證PCR反應的可靠性,又可
以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;
7、由于實際操作時加樣器很容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,所以操作者應該使用高壓處理過的或可替換的加樣器。假如沒有這種特殊的加樣器,至少在PCR操作過程中加樣器應該,嚴禁交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個相鄰區(qū)域使用;
8、重復實驗,驗證結果,慎下結論。
由于PCR實驗操作非常專業(yè),在設計PCR基因擴增實驗室時設計師也要充分考慮上述技術要求,避免PCR實驗室在后續(xù)使用時出現(xiàn)返工、返修問題。